血球計(jì)數(shù)板的發(fā)明已經(jīng)有超過100年的歷史了，*，這種傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法雖然廉價(jià)，但卻很費(fèi)時(shí)費(fèi)力。其實(shí)，除了這點(diǎn)以外，使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)還有許多可變的因素，使計(jì)數(shù)結(jié)果波動(dòng)，可能會(huì)大大影響我們的實(shí)驗(yàn)。

首先，由于使用的是顯微鏡肉眼觀測計(jì)數(shù)，人為的因素多，使計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確，誤差大。尤其是經(jīng)過了一整天繁重的實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行計(jì)數(shù)，或需要同時(shí)對上樣的多種樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，容易使人頭昏眼花，結(jié)果的準(zhǔn)確性更難保證。

第二，重復(fù)性差導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度低。大家進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)常需要進(jìn)行3次以上的平行實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性和可信度。有時(shí)候是同一個(gè)操作者分別在幾天重復(fù)同一實(shí)驗(yàn)，有時(shí)候是不同操作者重復(fù)同一實(shí)驗(yàn)。同一操作者細(xì)胞計(jì)數(shù)的重復(fù)性不會(huì)太好，不同操作者細(xì)胞計(jì)數(shù)的重復(fù)性就更差了，這會(huì)導(dǎo)致上樣量的波動(dòng)，使得平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果CV值增高，可信度降低，在發(fā)文章的時(shí)候達(dá)不到評委的要求，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有被挑戰(zhàn)，要求重做或補(bǔ)做實(shí)驗(yàn)，或被退回的可能。

第三，需要合適的稀釋倍數(shù)。稀釋不夠，細(xì)胞太濃，不僅數(shù)的時(shí)間很長，還會(huì)導(dǎo)致數(shù)得眼花，數(shù)著數(shù)著就忘記哪些已經(jīng)被數(shù)過，容易數(shù)錯(cuò)。稀釋過度，細(xì)胞太稀，會(huì)使細(xì)胞分布不均勻，計(jì)數(shù)的結(jié)果代表性下降，誤差增大。一般來說，使得稀釋后的細(xì)胞在1x10⁵-1x10⁶/mL濃度范圍內(nèi)，使標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算5個(gè)方格共會(huì)數(shù)到50~500個(gè)細(xì)胞。這個(gè)濃度范圍很窄，這就要求我們在稀釋細(xì)胞前能較好地估計(jì)原始樣品的濃度，但很多時(shí)候都是很困難的。

第四，由于血球計(jì)數(shù)板使用的是抽樣計(jì)數(shù)的原理，抽樣計(jì)數(shù)時(shí)幾個(gè)細(xì)胞數(shù)目的誤差，會(huì)導(dǎo)致原始樣品的細(xì)胞數(shù)目的變化被極快地放大。若原始樣品的細(xì)胞濃度為2x106/mL，稀釋5倍后，血球計(jì)數(shù)板5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方格共會(huì)數(shù)到200個(gè)細(xì)胞，若每個(gè)方格不小心少數(shù)了3、4個(gè)細(xì)胞，則計(jì)算出來的zui終濃度為1.82x10⁶/mL，會(huì)導(dǎo)致原始樣品的濃度產(chǎn)生180,000個(gè)/mL的差異。（同樣是原始濃度為2x10⁶/mL的細(xì)胞樣品做5倍的稀釋，Scepter 計(jì)數(shù)的是50µL稀釋樣品中的全部細(xì)胞的數(shù)目（即2x10⁴個(gè)細(xì)胞），因此能更準(zhǔn)確、更地計(jì)數(shù)。）

還有，對于壓線的細(xì)胞的計(jì)數(shù)與否需要遵循前后一致的原則（一般只計(jì)數(shù)大方格的上方和右方線上的細(xì)胞），這需要計(jì)數(shù)時(shí)提高熟練程度，才能提高重復(fù)性。

血球計(jì)數(shù)板升級替代方案

可能不少老師和同學(xué)都不知道，血球計(jì)數(shù)板是由法國科學(xué)家Louis-Charles Malassez于19世紀(jì)研發(fā)，用于血細(xì)胞計(jì)數(shù)，因此而得名。這項(xiàng)古老而又傳統(tǒng)的技術(shù)一直沿用至今，但并未隨著科研進(jìn)步而發(fā)展，還給越來越多的研究者帶來很多困擾。

升級是硬道理

古語：“工欲善其事，必先利其器”。小米加能獲得抗戰(zhàn)勝利，但恐怕難以贏得現(xiàn)代戰(zhàn)爭。細(xì)胞研究應(yīng)是同理，如今技術(shù)革新已推進(jìn)到了流式細(xì)胞術(shù)，然而國內(nèi)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室尚不能負(fù)擔(dān)的起巨大的投入，或許小型細(xì)胞計(jì)數(shù)/分析設(shè)備是多數(shù)實(shí)驗(yàn)者的。

市場上常見的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器，其主要可分為兩類：基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)器(Automated vision-based counter)和基于庫爾特電阻抗原理的細(xì)胞計(jì)數(shù)器（Scepter為代表），兩者原理及操作方法大相徑庭。以下報(bào)告將從性、可靠性、便捷性等方面進(jìn)行比較，希望能對廣大細(xì)胞學(xué)研究者有所助益。

【準(zhǔn)確性比較】

圖1. 不同細(xì)胞濃度下各種細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)結(jié)果與實(shí)際數(shù)值的對比

 
上圖可見：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在高細(xì)胞密度時(shí)，計(jì)數(shù)結(jié)果與實(shí)際細(xì)胞密度有偏差，而基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)器則在多個(gè)濃度下均有偏差。這表明基于庫爾特原理的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法在計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性上優(yōu)于其他兩種細(xì)胞技術(shù)方法。（樣品為常見的COS7細(xì)胞）

【可靠性比較】

圖2. 不同細(xì)胞濃度下細(xì)胞計(jì)數(shù)的可重復(fù)性比較

 
上圖可見：Scepter的可重復(fù)性均明顯好于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)器。（樣品為19種細(xì)胞系）

elisa試劑盒，人血清，放射免疫試劑盒，PCR代測，WB代測，放射免疫代測，進(jìn)口ELISA試劑盒，酶聯(lián)免疫代測，酶聯(lián)免疫試劑盒，染色液-信帆生物 

 
上圖可見：傳統(tǒng)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)時(shí)間遠(yuǎn)長于其他兩種計(jì)數(shù)。庫爾特原理計(jì)數(shù)法與基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)法相比，計(jì)數(shù)速度更為穩(wěn)定，而且計(jì)數(shù)時(shí)間約為后者的一半。Scepter計(jì)數(shù)時(shí)間zui短，平均時(shí)間僅為14秒。（樣品為常見的SF9，MCF7，HEK293細(xì)胞）

數(shù)據(jù)來源：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，您還在使用么？

Scepter的人性化設(shè)計(jì)使得使用者能夠輕易上手，只需要五步：儀器校驗(yàn)、加載芯片、檢測樣品、卸下芯片、數(shù)據(jù)分析，操作方法和移液器相同，而且便于超凈臺內(nèi)操作。

選擇Scepter™手持式細(xì)胞計(jì)數(shù)器

以上可見，在滿足多數(shù)研究者基本細(xì)胞計(jì)數(shù)的要求上，手持式細(xì)胞計(jì)數(shù)器Scepter表現(xiàn)zui為優(yōu)異。此外，Scepter強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析能力也是其另一大特色。Scepter能夠提供細(xì)胞直方圖作為細(xì)胞計(jì)數(shù)依據(jù)，并且支持離線分析直方圖。通過直方圖可以獲知細(xì)胞直徑分布、細(xì)胞狀態(tài)、各細(xì)胞組分等數(shù)據(jù)。一次操作，更多的信息量，細(xì)胞研究水平因此而更上一層樓。因此，Scepter可以說是血球計(jì)數(shù)板的升級替代選擇。

索取Scepter產(chǎn)品資料

關(guān)于升級產(chǎn)品Scepter2.0：

 
榮獲諸多獎(jiǎng)項(xiàng)的Scepter在2011年升級到了2.0版，新上市的Scepter2.0保留了前代產(chǎn)品直方圖結(jié)果顯示、類似移液器的操作、14秒疾速計(jì)數(shù)等諸多特色，新增如下亮點(diǎn)：擴(kuò)大了可檢測的細(xì)胞粒徑（3-36μm），增強(qiáng)了計(jì)數(shù)性（在小顆粒物或小直徑細(xì)胞上檢測的性增強(qiáng)，CV<5%），同時(shí)升級了聯(lián)機(jī)軟件的功能，提供更加全面的數(shù)據(jù)分析，使之成為目前市場上小型細(xì)胞計(jì)數(shù)設(shè)備的選擇！同時(shí)，前代產(chǎn)品仍可以通過聯(lián)機(jī)升級固件，輕松獲得Scepter 2.0的所有功能，而不影響當(dāng)前的使用效果！更多詳情請垂詢默克生命科學(xué)部-2分機(jī)。

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