丙二醛(MDA)試劑盒基本信息

丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標，在酸性和高溫度條件下，可以與硫代酸(TBA)反應生成紅棕色的*川(3，5，5—*基惡唑-2，4。二酮)，其zui大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾，其中zui主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應產物的zui大吸收波長在450nm，但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值，所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子，通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1，根據植物樣品量和提取液的體積，加入Fe3+的終濃度為0．5umol·L-1。

丙二醛(MDA)試劑盒檢測技術簡介

雙抗體夾心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

　　3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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補體3a（C3a）試劑盒基本信息

補體(complement，C)是存在于正常人和動物血清與 組織液中的一組經活化后具有酶活性的蛋白質。早在19世紀末Bordet即證實，新鮮血液中含有一種不耐熱的成分，可輔助和補充特異性抗體，介導免疫溶菌、溶血作用，故稱為補體。補體是由30余種可溶性蛋白、膜結合性蛋白和補體受體組成的多分子系統(tǒng)，故稱為補體系統(tǒng)（complement system）。根據補體系統(tǒng)各成分的生物學功能，可將其分為補體固有成分、補體調控成分和補體受體（CR）。

補體3a（C3a）試劑盒的顯色與比色

顯色

　　顯色是ELISA試驗中zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。適當提高溫度，有助于加速顯色。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。在定量檢測中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。ELISA顯色結果通過酶標儀進行，可減少實驗誤差，提高臨界值樣本的分析準確度。盡量避免肉眼直接判斷結果，因為不同個體的視覺存在差異。應注意，加顯色劑時，要保持顯色劑不外流。加終止液時應避免產生較多氣泡，否則可能使假陽性結果的出現(xiàn)概率增加。

比色

　　比色的方法有目視法和酶標比色法2種。目視法簡單明了，但對同一標本，操作者的不同有時會出現(xiàn)不同的結果，具有一定的主觀性。比色的結果通常用光密度表達，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度表達。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時的適宜室溫在15℃~30℃之間，使用前要先預熱儀器15~30min，使測得結果更為準確。比色前，應先用潔凈的吸水紙擦拭干凈板底附著的液體，然后將板正確放在酶標比色儀的比色架上。綜上所述，的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。在實際應用過程中，操作者必須熟練掌握基本操作技能，對每個環(huán)節(jié)進行嚴格仔細的核查，盡量避免假陽性和假陰性反應的出現(xiàn)，保證檢測結果真實可靠，為診斷和疾病防治提供可靠的理論依據。

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