蛋白快速銀染試劑盒操作步驟

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自備材料：

1、水平搖床或側(cè)擺搖床

2、去離子水(超純)

3、乙醇、冰乙酸

1、準(zhǔn)備工作：以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例，以凝膠全部浸沒到溶

液為準(zhǔn)，一般用量是 25ml，對(duì)于凝膠體積的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例

放大。整個(gè)銀染過程應(yīng)在搖床上進(jìn)行，搖床轉(zhuǎn)速控制在 60～70rpm。提前配制固定液，

即按無(wú)水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液，即按無(wú)水乙醇:去

離子水=1:4 的比例配制。

2、水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗 2 次，每次 5min。

3、固定：取凝膠放入 50～100ml 固定液中，在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 15～20min，重復(fù)固定步

驟 1 次

4、洗脫：取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次，每次 5min。

5、水洗：去離子水清洗凝膠 2 次，每次 5min。

6、增敏：配制銀染增敏工作液，即取   Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml  加入到 50ml

去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1×Silver  Stain

Sensitizer 孵育凝膠 2min，立即用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 1min。

7、銀染：配制銀染工作液，即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中，混勻，

即得 1×Silver Stain，一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。取凝膠入 1×Silver Stain，在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 10～

20min。

8、水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次，每次 30s，搖動(dòng)速度在 60～70rpm。

總的水洗時(shí)間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。

9、顯影：配制銀染顯影工作液，即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離

子水中，混勻，即 1×Silver Stain Developer，一般應(yīng) 30min 內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即

置于 1×Silver Stain Developer 中，室溫孵育 2～10min，直至蛋白條帶清晰可見。一般

顯色 30s 后就會(huì)出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影 2～3min，亦可延長(zhǎng)至 5min 以上，如果顯影效

果不佳，可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續(xù)顯影。

10、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上

搖動(dòng) 10min，以終止顯色反應(yīng)。(配制銀染終止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml

加入到 90ml 去離子水中，混勻，即 1×Silver Stain Stop Buffer，一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。)

11、保存：棄終止液，加入去離子水 50ml，搖床上搖動(dòng) 2～5min，棄液。短期保存于新鮮

去離子水，保存可以制備干膠。

 蛋白快速銀染試劑盒操作步驟