β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)檢測(cè)試劑盒原來(lái)可以檢測(cè)植物樣本

測(cè)定意義：                          
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性測(cè)定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。

測(cè)定原理：
β-1,3-GA水解昆布多糖，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端，通過(guò)測(cè)定還原糖生成速率來(lái)計(jì)算其酶活性。
 

產(chǎn)品內(nèi)容： 提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入 3.5mL 雙蒸水，充分溶解待用；

試劑二：液體 30mL×1 瓶，4℃保存； 標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，含 10mg 無(wú)水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入 1ml 蒸餾 水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用，4℃可保存 1 周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存 更長(zhǎng)時(shí)間。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

產(chǎn)品說(shuō)明： β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆 境條件下，可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測(cè)定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理 研究。 β-1,3-GA 水解昆布多糖，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端，通過(guò)測(cè)定還原糖生成速率來(lái) 計(jì)算其酶活性。

自備儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰 和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提?。?稱(chēng)取約 0.2g 組織，剪碎，放入預(yù)冷的研缽中，加入 1.0 mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿，12000g，4℃， 離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）： （見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）

取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 540nm 處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2， 可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定，ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

β-1,3-GA 活性計(jì)算：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度（x）和濃度（y，mg/ml）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA 帶入公式中計(jì)算出樣品中產(chǎn) 生的還原糖的含量 y 值（mg/ml）

（1） 按蛋白濃度計(jì)算 單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算 單位的定義：每 g 組織每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算 單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每小時(shí)產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。 β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.035mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度， mg/mL；W：樣本鮮重g。

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)檢測(cè)試劑盒原來(lái)可以檢測(cè)植物樣本