超好用的豬瘟（csfv）病毒免疫熒光檢測試劑盒

信帆生物供應(yīng)豬瘟（csfv）病毒免疫熒光檢測試劑盒，產(chǎn)品操作簡單，質(zhì)量穩(wěn)定，供應(yīng)！

【產(chǎn)品簡介】
豬瘟病毒免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，單克隆抗體先與病毒反應(yīng)，然后間接的與熒光抗鼠二抗反應(yīng)，用這種熒光抗體檢測細(xì)胞內(nèi)的豬瘟病毒含量。
【產(chǎn)品內(nèi)容】

【備用的器材】
長滿單層的  ST細(xì)胞1瓶
排槍
排槍配套使用的槍頭
加樣槽
離心管
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板兩塊       ST細(xì)胞
【試劑配置】
6%MEM培養(yǎng)基：MEM培養(yǎng)基+6%豬瘟血清
2%MEM培養(yǎng)基：MEM培養(yǎng)基+2%豬瘟血清
熒光二抗工作液：將濃縮熒光二抗按照1:50稀釋（用樣品稀釋液稀釋50倍，現(xiàn)用現(xiàn)配）
【操作步驟】
用6%MEM培養(yǎng)基將st細(xì)胞鋪96孔板一個（細(xì)胞密度為3*105/ml），次日棄上清接毒。
接毒步驟如下：
1. 無血清培養(yǎng)基將病毒液作連續(xù)10倍的稀釋，從100-10-8。
2. 將稀釋好的病毒接種到96孔培養(yǎng)板中，每一稀釋度接種一縱排共8孔，每孔接種100微升。
3. 放置于37℃吸附1小時后，補(bǔ)入2%MEM培養(yǎng)基每孔100ul，置于37℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
4. 設(shè)正常細(xì)胞對照，正常細(xì)胞對照作兩縱排。
5. 逐日觀察，一般需要觀察120小時即可測定熒光。
熒光測定步驟如下：
1.棄掉96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上清，每孔加入150微升樣品稀釋液，靜置30秒，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗3次，吸干水分，不用拍板。
2. 每孔加入50微升-20℃的固定液放入-20℃靜置20分鐘，棄掉上清，不用拍板。
3.同上（一步）重復(fù)洗滌3次，吸干水分，不用拍板。
4. 每孔加入一抗工作液50ul，蓋上蓋板膜，放置于37℃40分鐘后，同上（一步）重復(fù)洗滌3次，吸干水分，不用拍板。
5. 每孔加入熒光二抗工作液50ul，蓋上蓋板膜，放置于37℃40分鐘后，同上（一步）重復(fù)洗滌3次，吸干水分，不用拍板。
6. 觀察熒光顯微鏡并根據(jù)下表記錄不同稀釋度的熒光孔數(shù)，之后根據(jù)10-1～10-8計(jì)算出病毒的TCID50含量。
例:

LgTCID50=l-d(s-0.5)      
L:高稀釋度的對數(shù)
D:稀釋度對數(shù)之間的差
S:陽性孔比率總和
LgTCID50=l-d(s-0.5) =-1-1*（3.375-0.5）=-3.875
  TCID50=10-3.875/ml
即：將該病毒稀釋10-3.875接種100ul可使50%的細(xì)胞發(fā)生病變。   
【注意事項(xiàng)】
（1）切記做不接毒的空白細(xì)胞對照。
（2）樣稀清洗與加樣時要溫柔，并從同一個位點(diǎn)加入。
（3）加樣槽用前請用一次性塑料手套套住，加不同溶液時更換手套，防止不同溶液的交叉污染。
（4）配制好的熒光二抗避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用，固定液放-20℃ 1h后再使用。
（5）操作過程中的移液、計(jì)時和洗滌必須精確，以免影響結(jié)果。
（6）被測病毒-20化開后需要及時接毒，不可放置室溫；配置好的培養(yǎng)放4℃于30天內(nèi)使用。
（7）如果不需要TCID50數(shù)值，請根據(jù)100～10-8直接觀察熒光顯微鏡即可。
【貯藏與有效期】
低溫避光保存，有效期為12個月。
【產(chǎn)品規(guī)格】2*96T

 超好用的豬瘟（csfv）病毒免疫熒光檢測試劑盒