離子交換色譜法

1、儀器與試藥

高效液相色譜系統(tǒng)：Agilent1200型，配四元泵、DAD檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器及色譜數(shù)據(jù)處理工作站（Agilent公司）；SUPELCOSILTMLC－SCX離子交換色譜柱（25cm×4.6mm，5μm，SUPELCO公司）。

馬來(lái)酸標(biāo)準(zhǔn)品（SUPELCO公司，純度99.3%）；富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.EhrenstorferGmbH公司，純度99.3%）；乙腈（色譜 純，F(xiàn)isher公司）；富馬酸（由交大瑞森渭南化學(xué)工業(yè)有限責(zé)任公司提供）；所用其他試劑均為分析純；水為超純水。

2、色譜條件

色譜柱：SUPELCOSILTMLC－SCX離子交換色譜柱（25cm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.005mol？L-1硫酸水溶液－乙腈 （60∶40）；流速：0.3mL？min-1；色譜柱溫度：35℃；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器（DAD）；檢測(cè)波長(zhǎng)：208nm；進(jìn)樣量：5μL。

應(yīng)用上述條件，取1.0mg？L-1的馬來(lái)酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣，取馬來(lái)酸為5.0mg？L-1、富馬酸為10.0mg/L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（分離度溶液）進(jìn)樣。

3、方法與結(jié)果

3.1樣品處理稱(chēng)取富馬酸樣品0.1g，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并定容至100.00mL，過(guò)0.45μm微孔濾膜，進(jìn)樣檢測(cè)。

3.2線(xiàn)性關(guān)系考察分別配制濃度為0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0mg？L-1的馬來(lái)酸系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣檢 測(cè)，并以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（X，mg？L-1）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)作圖，同時(shí)用zui小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程為 Y=87.916X–0.7097，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r為0.9999，線(xiàn)性關(guān)系良好。

3.3精密度與重現(xiàn)性

取濃度為1.0mg？L-1的馬來(lái)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣8次，計(jì)算8次進(jìn)樣的峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法的精密度，結(jié)果如表1所示，峰面積RSD為0.77%，精密度良好。

取同一批樣品，平行處理8份，依法進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算每份樣品中馬來(lái)酸含量，考察方法的重現(xiàn)性，結(jié)果如表1所示，RSD為3.17%，重現(xiàn)性良好。

表1精密度和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

精密度實(shí)驗(yàn)

進(jìn)樣次數(shù)12345678RSD（%）

峰面積85.792687.212286.056187.849787.230186.712986.809587.11570.77

重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

樣品編號(hào)12345678RSD（%）

含量（%）0.01010.01050.01030.00970.00990.00980.00960.01013.17

3.4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)為了考察方法的回收率，對(duì)6份富馬酸樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)水平為*水平0.1%，即1.0g？kg-1，回收率在99.4%～100.7%之間，RSD小于1.5%?；厥章手噩F(xiàn)性良好。

3.5檢測(cè)限將馬來(lái)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋進(jìn)樣，以10倍噪音（S/N=10）計(jì)，本方法zui小檢出濃度為0.05mg？L-1。以稱(chēng)取0.1g富馬酸樣品，定容100.00mL計(jì)算，富馬酸中馬來(lái)酸的zui低檢出限為0.05g？kg-1，即0.005%。

3.6樣品測(cè)定利用本方法測(cè)定了5批富馬酸樣品，馬來(lái)酸含量分別為0.0072%，0.0091%，0.0128%，0.0102%，0.0155%，均未超出*。

4、討論

實(shí)驗(yàn)中主要考察了檢測(cè)的流動(dòng)相條件，包括乙腈比例、硫酸濃度以及流速對(duì)峰形和分離度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，流動(dòng)相中的乙腈比例對(duì)富馬酸和馬來(lái)酸的峰形影 響zui為明顯，當(dāng)流動(dòng)相中不含乙腈時(shí)，溶劑效應(yīng)明顯，富馬酸和馬來(lái)酸分離度溶液的HPLC色譜圖如圖3所示，色譜峰拖尾嚴(yán)重，而且不能達(dá)到基線(xiàn)分離，隨著流 動(dòng)相中乙腈比例的升高，馬來(lái)酸和富馬酸的峰形變好，分離度變大，當(dāng)乙腈為40%時(shí)，HPLC色譜圖如圖1-B所示，色譜峰峰形尖銳對(duì)稱(chēng)。流動(dòng)相中硫酸濃度 對(duì)色譜峰峰形影響不大，但對(duì)分離度有一定的影響，實(shí)驗(yàn)中考察了硫酸濃度為0.005、0.01mol？L-1兩種情況，發(fā)現(xiàn)硫酸濃度變化對(duì)富馬酸的出峰時(shí) 間基本沒(méi)有影響，而硫酸濃度降低則可以使馬來(lái)酸出峰時(shí)間前移，分離度變大，所以選用硫酸濃度為0.005mol？L-1。流速對(duì)出峰時(shí)間和分離度有一定的 影響，而對(duì)峰形基本無(wú)影響，當(dāng)流速由0.3mL？min-1變?yōu)?.5mL？min-1后，富馬酸和馬來(lái)酸出峰時(shí)間均前移，分離度變小，所以選用流速為 0.3mL？min-1不僅能夠增大分離度，而且可以節(jié)省溶劑。選用本文的色譜條件，富馬酸和馬來(lái)酸的分離度達(dá)到3.1，符合食品法典委員會(huì) （CAC）及美國(guó)食用化學(xué)品法典（FCC）檢測(cè)要求。

馬來(lái)酸的紫外吸收?qǐng)D譜如圖4所示，zui大吸收波長(zhǎng)為208nm，富馬酸的紫外吸收與馬來(lái)酸基本相同，在本文色譜條件下未發(fā)生文獻(xiàn)報(bào)道的zui大紫外吸收波長(zhǎng)紅移現(xiàn)象[3]，而且在該波長(zhǎng)下HPLC色譜基線(xiàn)平穩(wěn)，所以選用檢測(cè)波長(zhǎng)為208nm。

1.馬來(lái)酸（maleicacid）；2.富馬酸（fumaricacid）

本文建立的檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性良好，而且該方法*符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)要求，可以為檢測(cè)富馬酸中的馬來(lái)酸提供有效手段，為保障富馬酸產(chǎn)品的質(zhì)量及對(duì)外貿(mào)易提供幫助。

建立離子交換色譜法檢測(cè)富馬酸中雜質(zhì)馬來(lái)酸。方法：樣品用流動(dòng)相溶解定容后，采用LC–SCX離子交換色譜柱（25cm×4.6mm，5μm） 分離，以0.005mol？L-1硫酸水溶液–乙腈（60∶40）為流動(dòng)相，流速0.3mL？min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)208nm。結(jié)果：樣品中富馬酸與馬來(lái) 酸分離度達(dá)到3.1，在0.1～5.0mg？L-1范圍內(nèi)，馬來(lái)酸峰面積與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r=0.9999），zui低檢出限達(dá)到0.05g？kg- 1，重現(xiàn)性良好。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，可用于富馬酸中馬來(lái)酸的檢測(cè)。

馬來(lái)酸（MaleicAcid）又名順丁烯二 酸，是富馬酸的順?lè)串悩?gòu)體，主要在生物試劑過(guò)程中引入，其含量高低直接反映生物試劑技術(shù)控制水平和產(chǎn)品質(zhì)量，食品法典委員會(huì)（CAC）及美國(guó)食用化學(xué)品法典 （FCC）均規(guī)定富馬酸中馬來(lái)酸的含量不得超過(guò)0.1%（1g？kg-1），所以建立富馬酸中馬來(lái)酸含量檢測(cè)方法對(duì)于控制富馬酸產(chǎn)品 質(zhì)量具有積極的意義。

關(guān)于馬來(lái)酸的檢測(cè)報(bào)道不多，主要為高效液相色譜法[1～3]，還有用毛細(xì)管電泳法[4]和離子色譜法檢測(cè)的 報(bào)道（戴安公司提供的資料），但反相高效液相色譜法存在分離度和重現(xiàn)性不理想的問(wèn)題，而且色譜峰較寬，而毛細(xì)管電泳和離子色譜在我國(guó)還不夠普及，本文利用 離子交換色譜柱對(duì)富馬酸中馬來(lái)酸進(jìn)行檢測(cè)，色譜峰形良好，分離度可達(dá)3.0以上，而且流動(dòng)相流速只有0.3mL？min-1，可節(jié)省溶劑，方法簡(jiǎn)便、快 速、準(zhǔn)確，實(shí)用性強(qiáng)，符合雜質(zhì)檢測(cè)要求。