總抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
試劑盒說(shuō)明書
總抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
試劑盒說(shuō)明書
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究
中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液
及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測(cè)定原理
在酸性環(huán)境下，物質(zhì)還原 Fe
3+ -三吡啶三吖嗪(Fe 3+ -TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的 Fe 2+ -TPTZ 的能力反映
了其總抗氧化能力。
自備實(shí)驗(yàn)用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。
試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，避光保存。
樣品的制備
(1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品
血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心
10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超 30 d）
后再測(cè)定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入
1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量（10
4 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞
加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，
4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
操作步驟
混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，使用前預(yù)溫至 37℃ 。
空白管 測(cè)定管
混合液（μL） 900 900
樣品（μL） 30
雙蒸水（μL） 120 90
充分混勻，反應(yīng) 10min，雙蒸水調(diào)零，1mL 玻璃比色皿，測(cè)定 593nm 處吸光值，△A= A 測(cè)定
-A 空白