如果正確使用細胞培養(yǎng)級鼠尾膠原蛋白 I型 

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鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)說明書

產(chǎn)品說明

鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I),5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L 乙酸, 無菌。

4度保存，切勿凍存，有效期一年。

本公司生物試劑的鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen¹ 的方法，通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。

鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。

使用方法

1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被 濃度： 1-5ug/cm²

以包被濃度為 2 ug/cm2 為例：

用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應的培養(yǎng)器皿中：

確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開蓋在超凈臺上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時后，用PBS洗3-4次后直接使用。

包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個月以上的時間。

2、三維膠原的制備

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。

需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水

A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul 鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。

B．含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul 鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注：鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。

本產(chǎn)品于實驗室研究用。

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