WB實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理

很多老師在做WB實(shí)驗(yàn)的時候，經(jīng)常問細(xì)胞樣本應(yīng)該如果處理，下面上海信帆技術(shù)小編給大家講解一下吧！

樣品處理及保存

1、懸浮細(xì)胞樣品：

把細(xì)胞及培養(yǎng)液一起收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。

2、貼壁細(xì)胞樣品：

2.1 胰酶消化：用胰酶將細(xì)胞消化后，含血清的培養(yǎng)基中和胰酶，吹打，收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。

2.2 細(xì)胞刮子收集細(xì)胞：對于某些蛋白（即對胰酶比較敏感或者實(shí)驗(yàn)特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后進(jìn)行WB檢測），直接用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，連同培養(yǎng)基收集到15ml或者50ml離心管中，1500rpm離心3min，棄去上清；加入10ml 冷PBS輕輕吹打，1500rpm，4℃離心3min，棄去上清；反復(fù)2次；第二次棄去上清后，用1ml 冷PBS重懸細(xì)胞，移入1.5ml微型離心管，2500rpm（500g），4℃離心5分鐘，盡量去除所有殘留上清，于-80度或者液氮凍存待用。在避免凍融的情況下，一般保存1年，建議盡快檢測。

WB實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞樣本應(yīng)該如何處理