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引物合成文獻上線啦

點擊次數(shù):665     更新時間:2023-06-29

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文章標題:《Rho激酶抑制劑Y-27632對肝癌HepG2細胞株增殖的影響及機制探討》


關鍵詞:

肝癌HepG2細胞;化療敏感性;順鉑;Rho激酶;Y-27632;


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引物合成是一種化學合成,一般都采用β--亞磷酰胺化學合成引物,合成時從3’→5’方向進行,通常3’端的第一個堿基結合在CPG (Controlled Pore Glass,CPG)上。

§脫保護:脫掉附加在CPG單體上的第一個堿基5’-OH基團上的保護基 (DMTr),準備附加下一個新的堿基。

§活化:活化新的堿基單體 (Phosphoramidite),準備與第一個堿基進行反應。

§偶聯(lián):第二個堿基與第一個堿基發(fā)生偶聯(lián)反應。

§封閉:將沒有反應的第一個堿基的5’-OH加帽封死 (Capping),使其不再進一步參與反應。

§氧化:將核苷亞磷酸酯氧化成更穩(wěn)定的核苷磷酸酯(即將三價磷氧化成五價磷)。

重復進行一至五的步驟,直至合成完所需的引物 DNA序列。合成結束后,將引物分子從CPG上切下,再進行進一步的純化。

純化 | 量體裁衣做選擇

DSL(脫鹽)純化,PAGE純化,HPLC純化是目前常會用到的幾種純化方式。建議您根據(jù)自己合成引物的長度和后續(xù)實驗的需要做出合適的選擇。

 

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