DiO細(xì)胞膜綠色熒光染色

服務(wù)介紹：

DiO是一種親脂性膜染料，可以標(biāo)記細(xì)胞膜和其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)。進(jìn)入細(xì)胞膜后可以側(cè)向擴(kuò)散，逐漸使整個(gè)細(xì)胞膜被染色。DiO在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞結(jié)合后熒光強(qiáng)度會(huì)大大增強(qiáng)，被激發(fā)后可以發(fā)出綠色熒光，并可以用標(biāo)準(zhǔn)的FITC濾光片檢測(cè)。DiO大激發(fā)波長(zhǎng)484nm，大發(fā)射波長(zhǎng)501nm。

實(shí)驗(yàn)流程：

1.細(xì)胞固定并破膜：培養(yǎng)好的細(xì)胞爬片倒去培養(yǎng)基，用PBS洗。4%多聚甲醛固定30min，PBS洗3次，每次5min，滴加0.1%TRITON，破膜20min. PBS洗滌2-3次。

2.加dio染料工作液：爬片稍甩干后用組化筆在蓋玻片中間細(xì)胞分布均勻的位置畫(huà)圈（防止液體流走），加50-100μ dio染料工作液，37℃孵育5-20分鐘，PBS洗3次，每次5 min。

3.DAPI復(fù)染細(xì)胞核：爬片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min

送樣運(yùn)輸要求：

固定好細(xì)胞， 換成PBS，4℃ 運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。目前只接受細(xì)胞爬片。