植物GUS染色

服務(wù)介紹

GUS基因存在于E.coli等一些細(xì)菌基因組內(nèi)，編碼β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase，GUS），該酶是一種水解酶，能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質(zhì)的水解，它可以將5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，縮寫為X-Gluc）水解，產(chǎn)生無色的吲哚氧基中間物，再經(jīng)氧化二聚化作用形成不溶的深藍(lán)色染料，使具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色。絕大多數(shù)植物細(xì)胞內(nèi)不存在內(nèi)源的GUS基因，GUS基因常作為轉(zhuǎn)基因植物的報(bào)告基因，尤其廣泛應(yīng)用于研究外源基因瞬時(shí)表達(dá)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)?？蛻籼峁US標(biāo)簽的轉(zhuǎn)基因植株或者特定部位的植物組織樣本，進(jìn)行樣本的整體染色后，即可清晰地觀察到GUS基因在植物各個(gè)部位的定位分布及含量的差異。

實(shí)驗(yàn)流程：

新鮮帶土或者帶培養(yǎng)基的整株植物活體運(yùn)輸或植物組織-20℃保存干冰冷凍運(yùn)輸—37℃恒溫箱避光染色—75%酒精脫色—觀察采圖。

結(jié)果判讀：

GUS陽性藍(lán)色，背景透明無色或淺黃色。

送樣運(yùn)輸要求：

1、新鮮帶土或者帶培養(yǎng)基的整株植物活體運(yùn)輸；植物組織-20℃保存干冰冷凍運(yùn)輸，7d內(nèi)送檢。

2、整株植物染色時(shí)，樣本長度不超過3cm。如超過3cm需將不同部位取下單獨(dú)進(jìn)行染色。

3、染完色采好圖的組織樣本，可取不同部位組織進(jìn)一步做石蠟包埋和石蠟切片（建議8μm），脫蠟后中性樹膠封片，顯微鏡觀察采圖或組織切片全景數(shù)字掃描（，進(jìn)一步在顯微結(jié)構(gòu)下觀察陽性信號及分布。