伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠FF親和填料

ConA NUPharose FF 

產(chǎn)品介紹

ConANUPharose FF 是將刀豆蛋白A(ConcanavalinA，簡稱 ConA)鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)，主要用于各種帶甘-露醇及葡萄糖殘基的糖蛋白(包括糖蛋白病毒)、多糖和糖脂的分離和純化。ConA 是從刀豆中提取出來的一種四聚體金屬蛋白，是凝集素的一種，在 Mn?和 Ca?存在的情況下，可結(jié)合 α-D-吡喃甘露糖基、a-D-吡喃葡萄糖基和具有 C-3、C-4 或 C-6 羥基空間相關(guān)殘基的分子。

ConA NUPharose FF 的應(yīng)用領(lǐng)域還包括酶-抗體偶聯(lián)物的純化、IgM 的純化、洗滌劑溶解的膜中細(xì)胞表面糖蛋白的分離純化、膜囊泡的分離以及含碳水化合物物質(zhì)組成變化的研究等。

1色譜柱裝填

(1)所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。

(2)填料用量計(jì)算:通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積X壓縮

比(也稱壓縮因子)。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降讀取的穩(wěn)定

體積。ConANUPharose FF的壓縮比為1.15。為使達(dá)到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，

也可以通過高流速壓柱。

以下闡述與層析系統(tǒng)連接時，填料的色譜柱裝填方法。

(3)填料清洗:將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽濾除去液體，并用約3倍

填料體積的純化水洗滌，重復(fù)3次，以除去保存液。

(4)裝柱填料懸液準(zhǔn)備:將填料轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適量的裝柱液，制成

50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

(5)裝填前準(zhǔn)備:在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下

端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

(6)裝填:將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)(必要時使用裝柱器)，

為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱

器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。

(7)壓柱:使柱內(nèi)填料自然沉降(或 10~20cm/h的低流速下沉降)，待填料沉降完

全后(填料與液體的界面清晰)，去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處;通

過高流速(推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa)，繼續(xù)壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標(biāo)

記界面穩(wěn)定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭

至標(biāo)記位置下方與壓縮比對應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速

平衡柱內(nèi)的填料。

伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠FF親和填料