硫酸酯-交聯(lián)纖維素

1 、產(chǎn)品介紹

NuPearla Sulfate是纖維素微球直接硫酸酯化后形成的親和層析分離介質(zhì)。與瓊脂糖相比，纖維素微球的原料有標(biāo)準(zhǔn)牌號，纖維素骨架不含陰離子基團，纖維素微球的非特異性吸附是瓊脂糖微球的1/10~1/3，例如本產(chǎn)品的纖維素基球?qū)?xì)胞色素C的非特異性吸附量可低至2 μg/mL。經(jīng)過硫酸酯化后，NuPearla Sulfate對多種活病毒、滅活的或結(jié)構(gòu)分裂的病毒、病毒或微生物抗原和肝素結(jié)合蛋白具有親和力。

同時，硫酸酯是一種耐鹽型陽離子交換配基，NuPearla Sulfate也可作為陽離子交換填料，對溶菌-酶的結(jié)合量可達(dá)180 mg/mL，且在50~200 mM NaCl鹽濃度下仍結(jié)合良好。

 2 、產(chǎn)品特點與技術(shù)指標(biāo)

注：a90%體積以上的微球在此粒徑范圍；b 10 cm 柱高下的測試流速。

3 、使用方法參考

3.1  色譜柱裝填

以下闡述與層析系統(tǒng)連接時，填料的色譜柱裝填方法。

（1）需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。

（2）填料用量計算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完-全讀取的穩(wěn)定 體積。NuPearla Sulfate 的壓縮比為 1.15。為使達(dá)到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。

（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復(fù)3次，以除去保存液。

（4）裝柱填料懸液準(zhǔn)備：將填料轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

（5）裝填前準(zhǔn)備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的裝柱液，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時使用裝柱器），為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。

（7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa），繼續(xù)壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標(biāo)記界面穩(wěn)定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標(biāo)記位置下方與壓縮比對應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內(nèi)的填料。 

3.2  柱效測定和評價

完成裝柱后、使用前可通過柱效測定和評價可以確認(rèn)層析柱裝填質(zhì)量。柱效通常用 理論塔板高度（HETP）和非對稱因子（As）來評價。

3.3  平衡與上樣（Equilibration & Loading）

在上樣前，可用初始緩沖液A在操作流速下平衡層析柱，觀察檢測器的變化，直到電導(dǎo)、pH 等參數(shù)不變。根據(jù)應(yīng)用不同，本產(chǎn)品的緩沖液體系可為磷酸鹽、檸檬酸鹽和Tris-HCl等，pH為4~9居多，例如10 mM PB +50~150 mM NaCl，pH7.5。

3.4  洗脫（Elution）

洗脫過程則可以進一步提高緩沖液A中的鹽濃度，添加0.5~2 M的NaCl可將目的蛋白有效洗脫。在前期工藝篩選時建議用線性梯度洗脫以確定合適的洗脫濃度，在工藝優(yōu)化和確定時建議用階躍梯度洗脫，以節(jié)省洗脫液體積和提高效率。

3.5  再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）

通常上述的再生過程可將填料徹-底清洗。若發(fā)生柱壓升高，或為了避免交叉污染，可采用以下溶劑進行再生與在位清洗：1~2mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH、70%乙醇或30%異丙醇等。在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱體積的純水除去上述溶劑。

3.6  填料保存

填料的初始保存液為20%乙醇，使用過后可繼續(xù)用20%乙醇保存。保存溫度在2~30 ℃為宜，不可凍存。