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MTT實(shí)驗(yàn)代測(cè)

MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，漢語(yǔ)化學(xué)名為 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT法，又稱MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

MTT實(shí)驗(yàn)代測(cè)

服務(wù)說(shuō)明

MTT細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

1、細(xì)胞種板：將對(duì)數(shù)生細(xì)胞用胰蛋白酶消化，配制成濃度為1-10×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，按10000細(xì)胞／孔接種于96孔板，每孔加100μl，置于CO2（5％）培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)24h以貼壁。

2、加藥處理：繼續(xù)培養(yǎng)0h、12h、24h、36h分別更換為100μl細(xì)胞樣品各自對(duì)應(yīng)的含有一定濃度藥物的培養(yǎng)基，對(duì)照組更換為含溶劑的培養(yǎng)基，分別記為藥物處理48h、36h、24h、12h。每個(gè)樣本濃度設(shè)三個(gè)重復(fù)。

3、MTT反應(yīng)：所有孔中加入20μl 濃度為5mg/ml的、新鮮配制的MTT溶液，培養(yǎng)箱中孵育4小時(shí)，使MTT還原為甲瓚（此時(shí)倒置顯微鏡下可看到孔板內(nèi)的細(xì)胞周圍出現(xiàn)絲狀紫色結(jié)晶體）。

4、DMSO溶解甲瓚：小心的吸除上清液，每孔加DMSO（二甲基亞砜）150μl，用搖床搖勻。

5、測(cè)吸光度值：使用酶標(biāo)儀測(cè)定570nm光吸收值，以溶劑處理細(xì)胞為對(duì)照組，按公式計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率。

抑制率＝1－（實(shí)驗(yàn)組-空孔）/（對(duì)照組-空孔）