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實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測

Real -Time PCR,即實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行解析的方法,它是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì),并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測,終對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來,廣泛應(yīng)用于生物研究的各個(gè)領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

產(chǎn)品型號(hào):

更新時(shí)間:2025-02-09

所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

信帆生物提供 RT-PCR檢測,實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測測,RT-PCR代測。客戶只需要提供樣本,其他所有試劑都由本公司提供。一般7-10天出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)報(bào)告,實(shí)驗(yàn)室所用儀器型號(hào),圖片,動(dòng)力擴(kuò)增曲線等。

 

Real -Time PCR,即實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行解析的方法,它是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì),并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測,終對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來,廣泛應(yīng)用于生物研究的各個(gè)領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。
 
服務(wù)內(nèi)容
    通過用SYBR熒光染料法 或者TaqMan熒光探針法,我們能為客戶提供實(shí)時(shí)熒光定量PCR全套技術(shù)服務(wù)。同時(shí)我們將提供給客戶完整的實(shí)驗(yàn)資料和分析步驟,客戶只需提供標(biāo)本和標(biāo)本的基本信息。

 

技術(shù)優(yōu)勢


1. 使用進(jìn)口穩(wěn)定的定量PCR儀

2. 核心試劑采用原裝試劑,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,重復(fù)性好。
3. 豐富的qPCR經(jīng)驗(yàn),基因類別有DNA、mRNA、miRNA等;物種類別有人、鼠、雞、牧草、酵母菌、金黃色葡萄菌等。

 

客戶須知:

  1. 客戶須在實(shí)驗(yàn)開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量,并提供相關(guān)信息,客戶應(yīng)當(dāng)清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定;
  2. 盡可能新鮮和足量的組織(50-100mg)、細(xì)胞樣品(106)或血清,或直接提供純化好的總RNA≥0.5μg/樣品);
  3. 所需要檢測mRNA注冊號(hào)和名稱;

服務(wù)承諾:

  1. 我方對實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及客戶所提供的資料保密,未經(jīng)客戶許可,我方不得將客戶的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和相關(guān)信息對外公布。
  2. 本公司將在收到客戶樣本后并簽訂合同的第二個(gè)工作日起開始檢測工作。
  3. 提供給客戶原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)流程及報(bào)告。

 

RT-PCR實(shí)驗(yàn)流程

1.實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備;

2.樣本總RNA提取;

3.RNA濃度檢測;

4.反轉(zhuǎn)錄;

5.數(shù)據(jù)分析及結(jié)論。

 

 
PCR實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng):
1)所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌。
3)在20
到25貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
4)所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
5)所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
7)樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。


 


 

熒光定量 PCR 中的一些術(shù)語
CT值:熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)意義顯著增長(即穿過閾值線)時(shí)的循環(huán)次數(shù),或者說是從基線到指數(shù)增長的拐點(diǎn)所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。
閾值:閾值的默認(rèn)設(shè)置是 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的 10 倍。
CT值與起始模板的量成線性關(guān)系。

 

 

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