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超微量總ATP酶實(shí)驗(yàn)代測(cè)

測(cè)定原理：ATP酶可分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷，測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量可判斷ATP酶活力的高低。
ATP酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜上的一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具有重要的作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，此酶活力發(fā)生一系列改變，另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關(guān)。ATP酶活力的大小是各種細(xì)胞能量代謝及功能有無(wú)損傷的重要指標(biāo)。

ATP酶又稱(chēng)為三磷酸腺苷酶，是一類(lèi)能將三磷酸腺苷（ATP）催化水解為二磷酸腺苷（ADP）和磷酸根離子的酶，這是一個(gè)釋放能量的反應(yīng)。在大多數(shù)情況下，能量可以通過(guò)傳遞而被用于驅(qū)動(dòng)另一個(gè)需要能量的化學(xué)反應(yīng)。這一過(guò)程被所有已知的生命形式廣泛利用。

 產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：
1、快速簡(jiǎn)便：全程約50分鐘，可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微：本法取樣本量100ul。
3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個(gè)月有效。
4、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
5、回收試驗(yàn)： X =103.3%。
6、受外界影響因素小：干擾因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
7、測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物組織、紅細(xì)胞以及各種培養(yǎng)細(xì)胞、各種水產(chǎn)等，效果均佳。
所需儀器及自備試劑：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為636nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器

樣本收集與前處理：
紅細(xì)胞：需按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。

操作流程：
1、酶促反應(yīng)：按說(shuō)明操作加入樣本100l和混合試劑，37℃準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘
2、加R4，3500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清
3、定磷：取上清液加入顯色劑，室溫靜置2分鐘加R6
4、室溫靜置5分鐘636nm波長(zhǎng)，1cm光徑，比色

超微量總ATP酶實(shí)驗(yàn)代測(cè)