全功能免疫印跡（WB）實(shí)驗(yàn)代測

全功能免疫印跡（WB）簡介：

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

全功能免疫印跡（WB） 原理：

通過SDS-PAGE凝膠將細(xì)胞或生物樣品內(nèi)的蛋白按照蛋白分子量從大到小規(guī)律分離開。經(jīng)過PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜).上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)(目前主要用HRP標(biāo)記的第二抗體) , 經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分(目前主要使用魯米諾和二抗中的HRP 反應(yīng)發(fā)出熒光,通過儀器或者膠片顯色)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

全功能免疫印跡實(shí)驗(yàn)說明：

1、客戶需提供新鮮冰凍組織/細(xì)胞/血漿/外泌體/其他體液及一抗)

2、每張膜（1-8個(gè)樣品，一個(gè)抗體）

全功能免疫印跡（WB）實(shí)驗(yàn)操作流程：

1、細(xì)胞及組織蛋白質(zhì)抽提；

2、蛋白質(zhì)定量；

3、變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)；

4、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜；

5、膜的封閉；

6、一抗、二抗孵育；

7、結(jié)果檢測：化學(xué)發(fā)光法檢測，X 膠片曝光顯影；

8、數(shù)據(jù)分析；

全功能免疫印跡（WB）實(shí)驗(yàn)代測