蛋白A瓊脂糖凝膠

英文名稱：Protein A Berpharose FF

貨號(hào)：B2832

規(guī)格：1ml

1.產(chǎn)品介紹

 Protein A Berpharose FF親和介質(zhì)以自制的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，以重組蛋白A（rProtein A）為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，配基不易脫落，壽命長(zhǎng)，使用方便，應(yīng)用廣泛。蛋白A（Protein A）能特異性地與抗體IgG分子的Fc區(qū)結(jié)合，所以Protein A親和介質(zhì)可用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，經(jīng)過(guò)一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到性價(jià)比高的抗體。

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、25ml、100ml、500ml、1L 純化流程

應(yīng)用舉例：

結(jié)合緩沖液：20 mM磷酸緩沖液，150 mM NaCl，pH 7.0

洗脫緩沖液：0.1M甘-氨酸，PH3.0或0.1M檸檬酸緩沖液，pH 4.0

中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1) 1 ml重組蛋白A瓊脂糖凝膠預(yù)填柱用5-10個(gè)柱床體積的蒸餾水洗去保存液。

2)用結(jié)合緩沖液結(jié)合緩沖液平衡5-10個(gè)柱床體積。

3)將5 ml人多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋到50ml，0.45μm濾膜過(guò)濾上樣。

4)用結(jié)合緩沖液再洗5-10個(gè)柱床體積。

5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性。

6)每次使用后依次使用3個(gè)柱體積的結(jié)合緩沖液，5個(gè)柱體積的去離子水，5個(gè)柱體積的20%的乙醇平衡保存，防止填料被細(xì)菌污染。

7) SDS-PAGE電泳分析。

6.注意事項(xiàng)：

1)樣品洗脫后一般pH很低，應(yīng)立刻用堿性中和緩沖液（如1MTris-HCl，pH8.5）將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5-10%、pH7.5的緩沖液（如1MTris-HCl或1M磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

2)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

3)填料再生清洗：隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，嚴(yán)重影響純化效果，這時(shí)需要對(duì)填料進(jìn)行再生清洗（如下步驟）

去除沉淀或變性物質(zhì)：用2倍柱體積的6M鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。

去除疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)：用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™X-100清洗，然后然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗

4)本產(chǎn)品保存條件：20%乙醇，4~8℃。