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ELISA試劑盒篇:ELISA實驗應(yīng)該如何正確操作
2019-04-12祝賀上海生命科學研究院文章在學術(shù)期刊發(fā)表成功
2016-09-08產(chǎn)品型號:
更新時間:2026-04-30
產(chǎn)品名稱:人花生四烯酸(AA)ELISA檢測試劑盒
貨號:XTY16048
規(guī)格:48T/96T
儲存條件:2-8℃
有效期:6個月
用途:僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中花生四烯酸(AA)的濃度。
【檢驗原理】
本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。在預(yù)包被抗花生四烯酸(AA)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,加入人 花生四烯酸(AA)校準品和待測樣本,再加入HRP標記的人 花生四烯酸(AA)抗原(酶標抗原),經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結(jié)合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-酶標抗原的免疫復合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,在終止液(不含硫酸)作用下,最終轉(zhuǎn)化為黃色,在酶標儀450nm波長上測定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測樣品中人 花生四烯酸(AA)的濃度負相關(guān)。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中人 花生四烯酸(AA)的濃度。
【產(chǎn)品性能指標】
1.外觀和物理檢查:試劑盒應(yīng)組分齊全,內(nèi)外包裝均應(yīng)完整,標簽清晰,液體試劑無滲漏。各組分裝量不少于表1中要求。
2.線性: 用四參數(shù)Logistic曲線擬合(4-pl),在30 μg/mL – 480 μg/mL范圍內(nèi),劑量-反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)(r)的絕對值應(yīng)不低于0.9900。
3.精密度
3.1分析內(nèi)精密度:試劑盒質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于15.0%。
3.2批間精密度:在三個不同批次產(chǎn)品之間,質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于15.0%
4.最-低檢出限:最-低檢測濃度小于1.0 μg/mL。
5.質(zhì)控品測定值: 每次檢測結(jié)果均應(yīng)在允許范圍內(nèi)。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
4、組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9 mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘,取上清檢測。
人花生四烯酸(AA)ELISA檢測試劑盒