谷-胱甘肽氧化物酶(GSH-PX)測試盒

測定意義

谷-胱甘肽氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）是機體內(nèi)廣泛存在的

一種重要的催化*分解的酶。它特異的催化還原型谷-胱甘肽（GSH）對氧

化氫的還原反應，可以起到保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。GSH-PX 的活性中

心是硒半胱-氨酸，硒是 GSH-PX 的必需部分，每克分子酶含 4 克原子硒。測定 GSH-PX

的活力可以作為衡量機體硒水平的一項生化指標。

測定原理

谷-胱甘肽氧化物酶（GSH-PX）可以促進*（H2O2）與還原型谷胱甘

肽（GSH）反應生成 H2O 及氧化型谷-胱甘肽（GSSG），谷-胱甘肽氧化物酶的活力

可用其酶促反應的速度來表示，測定此酶促反應中還原型谷-胱甘肽的消耗，則可求

出酶的活力。

GSH-PX 的活力以催化 GSH 的反應速度來表示，由于這二個底物在沒有酶的條

件下，也能進行氧化還原反應（稱非酶促反應），所以最后計算此酶活力時必須扣除

非酶促反應所引起的 GSH 減少的部分。

GSH 量的測定：GSH 和二硫代*甲酸作用生成 5-硫代*甲酸陰離

子呈現(xiàn)較穩(wěn)定的黃色，在 412nm 處測其吸光度即可計算出 GSH 的量。

試劑盒有效期和保存條件

本試劑盒保存期：6 個月；貯存溫度：4℃。

注 意

注 1：空白管、標準管一般只需做 1—2 只。

注 2：取樣量及取樣濃度因樣品種類不同，其 GSH－PX 活力不一。

根據(jù)酶的百分抑制率與酶的活力呈拋物線關(guān)系 ，各種測定樣品取樣量及取樣濃度

不一樣，在每測定一種新的樣品前最好選擇一個取樣量及取樣濃度。

取樣濃度的摸索：

測試前先預試以確定取樣濃度：當您第一次使用本試劑盒測試某一種新

的樣品時最好先做三只不同濃度的測試管。例如：

測全血：則分別取用蒸餾水 1︰24、1︰49、1︰99 稀釋的溶血液 200μL 進行

預試；

測組織勻漿：則分別取 10%、5%、1%等的勻漿 200μL 進行預試（不同樣本

稀釋濃度不同）；

測血清：則分別取未稀釋的血清及用生理鹽水 1︰1、1︰4、1︰9、1︰19 稀

釋的血清 100μL 進行預試，

結(jié)果應該在 15%～

55%之間，然后取百分抑制率在 45%或 50%左右的一管作為取樣濃度，因為

酶的百分抑制率與酶的活力呈拋物線關(guān)系，若百分抑制率大于 60%時（曲線的平

坦部分），則需將樣品濃度稀釋后再測試。若百分抑制率小于 20%時，則需將樣

品濃度加大后測試。（需要注意的是組織勻漿或其他類似樣本有時本身濁度或顏

色有干擾時，預實驗不必通過抑制率計算，這時可以用對照 OD 值-測定 OD 值在

0.2 左右時來判定）

這樣做對科研結(jié)果分析及檢驗有很大幫助；若百分抑制率大于 60％或小于 10％，

各個測定組的結(jié)果在檢驗中有可能無顯著性差異。

全血中 GSH-PX 活力的測定

一、樣本的前處理：溶血液的配制

①、取肝素抗凝全血 20μL，以蒸餾水稀釋至 1ml，配成 1∶49 的溶血液；鼠血 10μL

加蒸餾水至 1ml，配成 1∶99 的溶血液。

②、充分混勻，放置 5 分鐘直至使玻璃管中的溶血液對光呈透明狀，方可進行

檢測。

③、已配好的溶血液中 GSH-PX 活力只能保持 45～60 分鐘，天冷時可延遲至 120

分鐘。如果當天來不及測定則以抗凝全血冰箱（ 4℃～8℃）保存，2～3 天內(nèi)

酶活力變化不大。

【注 1】請在正式實驗前做預實驗，詳見溶血液的取樣濃度及取樣量的摸

索舉例；

【注 2】測溶血液中 GSH－PX 含量要注意樣品測試前紅細胞一定要充分溶血。（以

對光觀察透亮為標準，若不透亮可以凍溶一次，但有部分大鼠及豬的紅細胞

是不可放置 0℃以下，否則不易溶血，例如糖尿病大鼠和部分正常大鼠的紅

細胞凍后很難溶血。在做正式試驗前最好先取 1～2 只樣本做預試。）

組織、線粒體和細胞膜中 GSH－PX 活力的測定

一、樣本的前處理：

1、10%組織勻漿的制備：

a.、取組織塊（0.2～1 克）用冰冷的生理鹽水漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱

重，放入 5～10ml 的小燒杯內(nèi)。

b、用量筒量取預冷的勻漿介質(zhì)（PH7.4，0.01mol/L 蔗糖，0.01mol/L Tris-HCl，

0.0001mol/LEDTA2Na 溶液）或生理鹽水。勻漿介質(zhì)或 0.86%生理鹽水的量

應該是組織重量的 9 倍。

c、將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩下的 1/3 勻漿介質(zhì)或 0.86%生理鹽

水用來沖洗殘余在小燒杯中的碎組織一起倒入玻璃勻漿管中進行勻漿，左

手持勻漿管將下端插入盛有冰水的器皿中，右手將桿垂直插入套管中上下

轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次（6～8 分鐘），充分磨碎，使組織勻漿化。或者用組織搗碎

機 10000～15000r/min 研磨制成 10%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿器制

成 10%組織勻漿（勻漿時間 10 秒/次，間隙 30 秒，連續(xù) 3～4 次，溫度 0～

4℃），心肌組織等可延長勻漿時間。

d、將制備好的 10%勻漿用普通離心機或低溫離心機 3000r/min 左右離心 10～

15 分鐘。取上清待測。【注】根據(jù)預試結(jié)果取濃度進行測定

2、線粒體的制備：

取 10%的組織勻漿 5～10ml，以 1000～2000r/min 離心 10 分鐘（用普通離

心機或低溫低速離心機），取上清液以 8000～10000r/min（低溫高速離心機）離

心 15 分鐘，沉淀物為線粒體。

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