肌酸激酶（CK）測(cè)定試劑盒

（比色法）

一、測(cè)定原理：

肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，后者很快全部水解為磷酸，此時(shí)三磷酸腺苷

和二磷酸腺苷仍穩(wěn)定，加入鉬酸銨可生成磷鉬酸，可進(jìn)一步還原成鉬藍(lán)，根據(jù)生成無(wú)機(jī)磷的量可算出酶的活力。

二、試劑組成與配制：（50 管/24 樣）

試劑一：液體 6mL×1 瓶，冷凍或者 4℃保存 3 個(gè)月。

試劑二：液體 1.5mL×1 瓶，冷凍或者 4℃保存 3 個(gè)月。

試劑三：粉劑 2 支，臨用時(shí)每支加雙蒸水 2 mL，4℃保存 6 個(gè)月。(注:粉劑量較少,可能附著于管壁或蓋子上,并非

空管,如使用時(shí)肉眼不可見(jiàn),可將其 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心2 分鐘后使用)

試劑四：粉劑 1 支，臨用前每支加雙蒸水 6mL, 4℃保存 6 個(gè)月。

試劑五：粉劑 2 支，冷凍保存 6 個(gè)月，臨用時(shí)每支加雙蒸水

2mL。配好后-20℃以下保存 5 天。

試劑六：液體 6mL×1 瓶，室溫或 4℃保存 6 個(gè)月。

試劑七：粉劑×1 瓶，4℃保存 6 個(gè)月，加雙蒸水 60mL，可適

當(dāng)加熱溶解，溶解后即為試劑七應(yīng)用液，4℃保存。

試劑八：粉劑×2 瓶，

4℃保存 6 個(gè)月，臨用時(shí)每支加雙蒸水 20mL，

溶解后即為試劑八應(yīng)用液 4℃保存，顏色變深后棄用。

2.5mol/L 硫酸：50mL×1 瓶,室溫保存 6 個(gè)月。

附帶雙蒸水 200mL，供配制試劑時(shí)用。

定磷劑的配制：試劑七應(yīng)用液︰試劑八應(yīng)用液︰雙蒸水︰

2.5mol/L 硫酸= 1︰1︰2︰1。配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色，

若無(wú)色則失效，若呈藍(lán)色則為磷污染，定磷劑需現(xiàn)用

現(xiàn)配。配好后 4℃可保存 48 小時(shí)。

四、注意事項(xiàng)：

1、所有樣品均要檢測(cè)測(cè)定管及對(duì)照管。

2、組織勻漿 4℃存放不可超過(guò) 10 小時(shí)，組織塊冷凍可延長(zhǎng)存

放時(shí)間。

3、血清 4℃存放不可超過(guò) 10 小時(shí)，冷凍可延長(zhǎng)存放時(shí)間。

4、此法為微量，靈敏，快速法。所以對(duì)測(cè)定管子要求嚴(yán)格，要

沒(méi)有一點(diǎn)磷的管子，若放過(guò) H3PO4或其緩沖鹽的管子，一

定要洗得非常干凈，用洗滌劑加水煮，再用自來(lái)水沖，最

后用雙蒸水沖。

這樣可以避免磷污染。這一點(diǎn)很重要，常常是實(shí)驗(yàn)成敗的

關(guān)鍵因素。

5、定磷劑配好后，不可放置太久，一般 4℃可保存 48 小時(shí)，現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時(shí)放冰箱。

6、大批量樣本操作時(shí)，采用簡(jiǎn)化操作法，這樣快捷、準(zhǔn)確。

7、所有配試劑的器皿要專用，或者用新的（包括吸硫酸的吸管，

及盛雙蒸水的器皿以及吸各種試劑的吸嘴）。

五﹑取樣濃度的摸索：

類不同，其取樣濃度不同。根據(jù)

CK 標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)附錄)，在每測(cè)定一種新的樣品前，最

好摸索一個(gè)取樣濃度，一般把OD 值控制在

0.05～0.5 之間。

1、血清（漿）取樣濃度的摸索：

由于正常情況下血清（漿）中的 CK 活力比較低。

但是如果用戶的模型組的 CK 活力會(huì)明顯增高，那在批量實(shí)驗(yàn)前取模型組做個(gè)預(yù)試，一旦 CK 活力＞

3.5U/mL，就需要用生理鹽水將該模型組血清稀釋后檢

測(cè)。若含量太高（曲線的平坦部分）,則看不出組與組

之間的顯著性差異。

2、組織勻漿取樣濃度的摸索：

如果您使用本試劑盒測(cè)試某一種新的樣品時(shí)，先做三支不同濃度的測(cè)試管。例如測(cè)肌肉組織勻漿，取

樣濃度分別為 1%、2%、5%，然后計(jì)算酶的濃度，選

取酶的濃度在 0.01～0.1mg/mL（即：酶活力在 0.35～

3.5U/mL，此段曲線基本呈直線關(guān)系）的樣本濃度為最

佳取樣濃度,進(jìn)行批量實(shí)驗(yàn)。

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