ATP 酶測(cè)定試劑盒

（貨號(hào)：A016-1比色法）

（可測(cè) Na +k +、Ca 2+Mg 2+、Ca 2+、Mg 2+-ATPase 樣本需高速離心 ）

此試劑盒可測(cè)試高速冷凍離心后的紅細(xì)胞膜、組織細(xì)胞膜、線粒體、微粒體的 ATP 酶。

一、試劑組成與配制（50 管/48 樣 A016-1-1）：

試劑一：液體 10mL×2 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×3 支，-20℃以下保存。用時(shí)每支加雙蒸水

5mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。余下的-20℃以下可保存一周。

試劑五：粉劑×1 支。用時(shí)加雙蒸水 5mL，適當(dāng)加熱溶解，

4℃保存。

試劑六：粉劑×1 支。用時(shí)加雙蒸水 10mL，室溫保存。

[注 1]

試劑七：液體 10mL×1 瓶。用時(shí)加雙蒸水至 25mL，4℃保

存。

試劑八：粉劑×3 瓶。用時(shí)一支加雙蒸水 40mL 溶解（溶解

后 4℃可避光保存一周）。

試劑九：粉劑×1 瓶。用時(shí)每瓶加雙蒸水 100mL 溶解。室

溫保存。

試劑十：2.5mol/L 硫酸 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑十一：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

雙蒸水: 1 瓶。

1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：用時(shí)將貯備液 10 倍稀釋?zhuān)?/span>

即取 1mL 加雙蒸水至 10mL。

定磷劑的配制：按雙蒸水∶試劑十∶試劑八∶試劑九

=2∶1∶1∶1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)

為淺黃色，若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色

則為磷污染，定磷劑需現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、試劑組成與配制（100 管/96 樣 A016-1-2）：

試劑一： 液體 10mL×3 瓶，4℃保存。

試劑二： 液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三： 液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四： 粉劑×5 支，

-20℃以下保存。用時(shí)每支加水 5mL，

現(xiàn)用現(xiàn)配。余下的-20℃以下可保存一周。

試劑五： 粉劑×2 支。用時(shí)每支加雙蒸水 5mL，適當(dāng)加熱

溶解，4℃保存。

試劑六： 粉劑×1 支。用時(shí)加雙蒸水 10mL，室溫保存。

[注 1]

試劑七： 液體 10mL×1 瓶。用時(shí)加雙蒸水至 25mL，4℃

保存。

試劑八： 粉劑×5 瓶。用時(shí)一支加雙蒸水 40mL 溶解（溶

解后 4℃可避光保存一周）。

試劑九： 粉劑×2 瓶。用時(shí)每瓶加雙蒸水 100mL 溶解。室

溫保存。

試劑十：2.5mol/L 硫酸 100mL×2 瓶，4℃保存。

試劑十一：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

雙蒸水: 2 瓶。

1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：用時(shí)將貯備液 10 倍稀釋?zhuān)?/span>

即取 1mL 加雙蒸水至 10mL。

定磷劑的配制：按雙蒸水∶試劑十∶試劑八∶試劑九

=2∶1∶1∶1 的比例配制，配好的定磷劑

應(yīng)為淺黃色，若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)

色則為磷污染，定磷劑需現(xiàn)用現(xiàn)配。

[注 1]：試劑六為過(guò)飽和溶液，所以在配制時(shí)用 90℃～

100℃的熱雙蒸水 10.3mL（熱脹冷縮）邊隔水加熱

邊用玻璃棒攪拌，以使其充分溶解。一次實(shí)驗(yàn)用不

完再用時(shí)可能有結(jié)晶，用之前可以再次邊隔水加熱

邊玻璃棒攪拌使其溶解。

[注 2]：配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可

以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

四、參考取樣量:

紅細(xì)胞膜取 100μL，2%組織細(xì)胞膜取 100μL，2%線粒

體取 100μL，2%微線粒體取 100-200μL。

五、如果您的樣本很多可以采用簡(jiǎn)便操作法：

測(cè)試前將 A、B、C、D、E 五種混合試劑配制好：

根據(jù)規(guī)范操作表中各管的試劑量乘以您所需要測(cè)試的

樣本數(shù)（n）再放 1～2 只管的量（避免吸到后試劑量不

夠），然后縱向混合。

七、測(cè)定意義：

ATP 酶存在于組織細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上，是生物膜上的一

種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具有重要

的作用。

八、測(cè)定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無(wú)機(jī)磷，測(cè)定無(wú)機(jī)磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

九、注意點(diǎn)：

1、 此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用

試管要求嚴(yán)格，要沒(méi)有一點(diǎn)磷，若試管放過(guò)磷酸或磷

酸鹽緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加

水煮，再用自來(lái)水沖，后用雙蒸水沖干凈。用

一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測(cè)成敗的

關(guān)鍵。

2、 定磷劑配好后，不可放置太久，一般保存一天，

現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時(shí)放冰箱。

3、 采用先配 A、B、C、D、E 五種混合液中的幾種，

然后按簡(jiǎn)化操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。這樣快捷、準(zhǔn)確。

4、 配試劑的器皿均要專(zhuān)用，包括吸硫酸的吸管及盛

水的器皿，用新的。

5、本研究加厚的一次性塑料試管供應(yīng)，請(qǐng)?jiān)谟嗁?gòu)試劑

的同時(shí)訂購(gòu)一次性塑料試管。

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