高密度脂蛋白膽-固醇測(cè)試盒（ 直接法）

（ 直接法 分光光度計(jì)法）

一、操作過(guò)程:

1、樣本處理:

①、血清(漿)：直接測(cè)定，如超過(guò)線性范圍用生理鹽水稀

釋后測(cè)定。

②、培養(yǎng)液樣本：吸取培養(yǎng)液，1000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，

取上清測(cè)定。[注]：一般建議細(xì)胞密度在 100 萬(wàn)個(gè)/mL

以上。

③、組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g)：體積(mL)=1：

9 的比例，加入 9 倍體積的勻漿介質(zhì)，冰水浴條件下

機(jī)械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液待測(cè)。

[注]:如組織樣本為非高脂樣本，勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸

鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取;如組

織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本，勻漿介質(zhì)可統(tǒng)

一用無(wú)水乙醇進(jìn)行提取。

④、細(xì)胞樣本：

A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出，1000 轉(zhuǎn)/分，

離心 10 分鐘，棄上清液，留細(xì)胞沉淀；用等滲緩

沖液（推薦 0.1mol/L 、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液）

清洗 1～2 次，同樣 1000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，棄

上清液，留細(xì)胞沉淀；

B、細(xì)胞破碎:加入 0.2～0.3mL 的勻漿介質(zhì)（推薦

0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）

進(jìn)行勻漿，冰水浴條件下超聲破碎(功率：300W,3～

5 秒/次，間隔 30 秒，重復(fù) 3～5 次)或手動(dòng)勻漿，

制備好的勻漿液不離心待測(cè)。也可采用裂解液裂解

(推薦 TritonX-100，1～2%，裂解 30～40 分鐘)，

裂解好的液體不離心直接測(cè)定。[注]：建議細(xì)胞密

度在 100 萬(wàn)個(gè)/mL 以上。破碎好的液體可顯微鏡觀

察細(xì)胞是否破碎

五、性能指標(biāo)：

1、試劑空白管吸光度≤0.10。

2、線性范圍：0～5.16mmol/L，r 2＞0.990。

3、靈敏度：測(cè)試 1.00mmol/L 被測(cè)物時(shí)，吸光度值△A 大于

0.04。

4、準(zhǔn)確度：相對(duì)偏差≤10%。

5、精密度：CV≤3%，批間相對(duì)極差≤5%。

6、穩(wěn)定性：原包裝試劑盒在 2℃～8℃避光保存，有效期為

12 個(gè)月。開(kāi)啟后 2℃～8℃避光保存，可穩(wěn)定一

個(gè)月。

六、注意事項(xiàng):

1、本產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床診斷，切勿服用。

2、樣品含量如超出檢測(cè)范圍，可用生理鹽水稀釋樣

本后進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

3、試劑防止葡萄糖、膽-固醇等試劑的污染。

4、試劑與樣本量可按照儀器要求，按比例增減。

5、樣本中 HDL-C 含量較低時(shí)，可以加大樣本取樣量（如取

10μL 或 20μL，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品需要稀釋相應(yīng)的倍數(shù)后和樣

本取樣量一致）后測(cè)定。

6、標(biāo)準(zhǔn)品粉劑為凍干粉，溶解時(shí)間較長(zhǎng)，配置時(shí)可提前半

小時(shí)配制。

七、參考文獻(xiàn)：

1、Nader Rifai,Thomas G.Cole,Elizabeth lannotti.

Clin.Chem.JuL 1998;44:1452-1458.

2 、 Y Okamoto, S Tanaka,H Nakano.Clin.Chem. Dec

1995;41:1784.

八、參考值：

大鼠血漿：0.45±0.16mmol/L

小鼠血漿：0.92±0.11 mmol/L

雞血漿：0.36±0.12（某些種類的能達(dá)到 2.33±0.38）mmol/L

魚血漿：0.99±0.22 mmol/L

小鼠肝臟：12.4±2.0 μmol/gprot

魚肝臟：39.36±12.37μmol/gprot

注：以上值僅供參考，并無(wú)臨床學(xué)意義。

高密度脂蛋白膽-固醇測(cè)試盒（ 直接法）