谷-氨酸脫氫酶（GDH）測(cè)試盒

( Glutamate dehydrogenase 分光光度法)

測(cè)定原理：

谷-氨酸脫氫酶 (Glutamate dehydrogenase，GDH)催化 NH4、a -酮戊二酸和 NADH，生成谷-氨酸和NAD，引起 340nm吸光度值下降:通過(guò)測(cè)定 34nm 處吸光度的下降速率，計(jì)算 GDH活性。

自備儀器或用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、蒸餾水。

粗酶液提取:

粗酶液提取詳見(jiàn)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)。測(cè)定組織和細(xì)胞同時(shí)需要測(cè)定蛋白濃度。可用本所的A045-2總蛋白定測(cè)試(馬斯亮法 A045-3A0454 定測(cè)(BCA 法進(jìn)行蛋白濃度的測(cè)定。

操作步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零

2、樣本測(cè)定:

(1) 工作液配制: 將試劑二中加入試劑一 50ml 混合解，置于恒溫水浴鍋預(yù)溫(哺乳動(dòng)物37C:非哺乳動(dòng)物 25C) 5min，現(xiàn)用現(xiàn)配

(2)測(cè)定: 取 0.95ml 工作液和 0.05ml 待測(cè)粗酶液于試管中，混勻并立即轉(zhuǎn)入 1ml 比色于波長(zhǎng) 340nm 測(cè)得 20 秒時(shí)吸光度值 A1 和5 分鐘 20 秒時(shí)的吸光度值 A2，計(jì)算A=A1-A2。(將樣本加入工作液中即進(jìn)行計(jì)時(shí))

谷-氨酸脫氫酶（GDH）測(cè)試盒