谷-胱甘肽—S 轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒

（Glutathione S-transferase GST 比色法）

二、適用范圍:

本試劑盒適用于檢測血清、組織、培養(yǎng)細(xì)胞等中谷-胱甘肽-S 轉(zhuǎn)移酶的活性。

三、所需儀器:

可見分光光度計(jì)(412nm)、37℃恒溫水浴箱、低速離心機(jī)

四、樣本前處理

1、50 倍稀釋的溶血液的配制：取肝素抗凝全血 20μL，以雙蒸水稀釋至 1mL，混勻，放置 5 分鐘

進(jìn)行測定。 配制好的溶血液要在 1 小時(shí)內(nèi)測定完，否則影響酶活力；抗凝全血若當(dāng)天來不及

測定可放冰箱 4℃保存，2～3 天內(nèi)酶活力變化不大。

2、組織勻漿、線粒體、微粒體等的制備見實(shí)驗(yàn)方法學(xué)部分。

3、血清或血漿可以直接取樣。

六、測定意義:

谷-胱甘肽 S—轉(zhuǎn)移酶（glutathione S—transferase GST）是一類與肝臟解毒有關(guān)的酶，在肝細(xì)

胞中存在量很大，所以當(dāng)肝細(xì)胞受損害時(shí)，GSH-ST 常常很早釋放到血中，血中 GSH-ST 的升高

常常早于谷丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（SGOT），因而 GSH-ST 的升高可作為肝臟損傷的

敏感指標(biāo)。

谷-胱甘肽 S—轉(zhuǎn)移酶廣泛存在于哺乳動(dòng)物各組織中，催化谷-胱甘肽（GSH）與化學(xué)物質(zhì)的親

電子基團(tuán)結(jié)合，最-終形成硫醚氨酸排出體外，在體內(nèi)解毒功能上起重要作用。

GSH-ST 具有消除體內(nèi)氧化物及解毒雙重功能。GST 在谷-胱甘肽氧化物酶（GSH-PX）

活力低下的條件下，只有清除體內(nèi)脂質(zhì)氧化物（LPO）的功能。

七、測定原理:

谷-胱甘肽+1-氯-2,4-*

GST

谷-胱甘肽*復(fù)合物+鹽酸

(GSH+C6H3（NO2）2Cl)

GST

C6H3（NO2）2GS+H++Cl -

GST 具有催化還原型谷-胱甘肽（GSH）與 1-氯-2,4-*（CDNB 底物）結(jié)合的能力，

在一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，其活性高低與反應(yīng)前后底物濃度的變化呈線性關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)通過檢測 GSH 濃度的高低來反應(yīng) GST 活力的大小，GSH（底物）濃度降低越多則

GST 活力越大。

八、注意事項(xiàng):

1、管子要洗干凈，先用溫肥皂水刷凈，再用自來水沖 20 遍以上，最后用雙蒸水過 1-2 次后烘干

即可。

2、2 號(hào)試劑配制時(shí)要加熱充分溶解（溫度可達(dá) 90℃～100℃）。

3、肝素抗凝全血放置冰箱存放時(shí)間不可超過 3 天，血漿、組織塊放-20℃可保存一個(gè)月以上。

4、1 號(hào)試劑配成貯備液后，冰箱冷藏至少可保存一個(gè)月。

5、1mmol/L 的 GSH 底物現(xiàn)用現(xiàn)配。

6、上清液當(dāng)天提取，當(dāng)天測試。

7、組織蛋白的測定方法有多種，本研究所有供應(yīng)。

8、樣品前處理參照實(shí)驗(yàn)方法學(xué)部分。

9、本試劑盒僅用于科研、實(shí)驗(yàn)室。

10、正式實(shí)驗(yàn)前最-好選取 2 例相對(duì)差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)試，以熟悉操作和確定樣本濃度（最

佳樣本濃度為對(duì)照管OD-測定管OD在0.2左右時(shí)為宜，不稀釋時(shí)達(dá)不到0.2則直接原液操作）。

谷-胱甘肽—S 轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒