尿蛋白定量測(cè)試盒檢測(cè)原理

一、測(cè)定原理：

  在酸性介質(zhì)中，CBB 與蛋白質(zhì)的 NH3+基團(tuán)結(jié)合引起由棕色到蘭色的顏色變化，在 595nm 處有大吸收峰。

二、試劑組成：（試劑盒有效期 6 個(gè)月）

試劑一：CBB 試劑 60mL×1 瓶， 4℃保存。用時(shí)按 CBB 試劑：蒸餾水=1∶4 比例(即 5 倍稀釋)配制成 CBB 應(yīng) 用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 

試劑二：524mg/L 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 0.5mL×1 支，4℃可保存 1 個(gè)月（-20℃冷凍保存，可存放 6 個(gè)月）。 

三、所需儀器及試劑： 

可見(jiàn)光分光光度計(jì)及 1cm 光徑比色皿（或酶標(biāo)儀（595nm）及 96 孔板），渦旋混勻器，蒸餾水。

四、操作方法：

五、計(jì)算公式：

六、注意點(diǎn)： 

1、樣本蛋白濃度過(guò)低時(shí)可適當(dāng)加大取樣量（如取樣 0.1 或 0.2mL，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)稀釋 2 倍或 4 倍后和樣本量體 積一致，計(jì)算時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品濃度除以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)后再代入計(jì)算），而 CBB 應(yīng)用液量不變； 

2、測(cè)定管 OD 值過(guò)高時(shí)（測(cè)定 OD 減去空白 OD 后的差值比標(biāo)準(zhǔn) OD 減空白 OD 的差值的 2 倍還大的）要將樣 本用生理鹽水作一定稀釋后（稀釋后選擇測(cè)定 OD 值接近標(biāo)準(zhǔn) OD 值對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)）再測(cè)； 

3、本試劑盒也可用酶標(biāo)儀來(lái)讀數(shù)（如在反應(yīng)液靜置 5 分鐘后從每管中各取 0.2mL 到 96 孔板中（注意不要加入 氣泡），595nm 處讀數(shù)），計(jì)算公式不變。

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